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猪瘟疫苗与猪瘟的预防


来源:       发布时间:2012/3/7 0:00:00     点击率:601

猪瘟疫苗与猪瘟的预防

                     李中银

摘要:国际兽医局(OIE)将猪瘟列为A类传染病,我国也列为一类传染病,是强制预防接种的病种。我国多年实施预防为主的防制策略,猪瘟急性爆发流行已得到有效控制。但是近年来对免疫猪群进行血清学检测,发现不论免疫抗体阳性率、抗体滴度的高低都不尽人意,甚至部分猪只检测不出抗体,与此同时强毒抗体检出率却有所升高。临床表现为持续感染、怀孕母猪带毒综合症、新生仔猪先天感染及免疫耐受等。中国兽医药品监察所上世纪50年代培育成功的兔化弱毒“54-Ⅲ系兔化弱毒株”,国外称“中国株”或“C株”,人们通常称“兔化弱毒株”。猪瘟“C株”是全世界公认的安全稳定性及免疫原性最好的猪瘟弱毒活疫苗毒株,欧美一些国家利用此毒株生产的或疫苗,成功地控制或扑灭了猪瘟,我国长期实施全面普防,猪瘟仍是养猪业猪最严重的病毒性疾病之一,常防不止的根本原因是什么?是疫苗自身质量(效价指标低)?疫苗科学使用方面的问题?猪瘟流行出现了新的变化?抑或其它方面的问题?这些问题值得动物防疫监督部门的关注,也值得广大生猪养殖业主和从事动物疫病防治的科技工作者的探讨。

一、猪瘟疫苗

1、我国猪瘟疫苗研发过程及推广使用情况

解放后我国猪瘟曾经使用过猪瘟结晶紫甘油灭活疫苗、猪瘟大兔脾淋组织活疫苗、猪瘟牛体反应组织活疫苗、猪瘟乳兔组织活疫苗、猪瘟猪肾细胞活疫苗、猪瘟绵羊肾细胞活疫苗、猪瘟牛睾丸细胞活疫苗。上世纪50年代主要使用猪瘟结晶紫甘油灭活疫苗,此苗需用猪瘟强毒作生产用种毒,存在散毒的危险,当兔化弱毒株培育成功后,猪瘟结晶紫灭活疫苗就迅速被兔化弱毒活疫苗取代。1957-1975年使用猪瘟大兔脾淋组织活疫苗、猪瘟牛体反应组织活疫苗、猪瘟乳兔组织活疫苗。以猪瘟大兔脾淋组织活疫苗为主,除了各兽医生物药品厂生产一部分,以市(县)动物防疫部门现场生产为主。动物防疫部门在当地接种健康家兔,收取有热反应家兔的脾脏和淋巴结,进行磨苗配制并迅速使用,当时受冻干条件的限制,一般制作冻结疫苗或现磨现用。由于猪瘟大兔脾淋苗生产分散、质量难以掌控、保存时间不长、生产成本高等因素影响不易批量生产。1965年猪瘟乳兔组织活疫苗和牛体反应活疫苗研发成功,70年代前后主要使用由各兽医生物药品厂生产的猪瘟乳兔组织冻干活疫苗和牛体反应活疫苗。猪瘟组织苗都存在生产工艺较为原始、成品较难达到无菌要求、不易大批量生产难以满足猪瘟防疫的需要等缺点,中监所组织开展猪瘟细胞活疫苗的研发,首先研发成功原代猪肾细胞活疫苗,80年代前后主要使用猪瘟乳兔组织活疫苗和猪瘟猪肾细胞活疫苗。猪瘟猪肾细胞活疫苗使用同源细胞生产,受当时猪瘟强毒检测技术的影响,曾经出现过疫苗中带有野毒的问题,为避免用同源细胞生产疫苗有污染强毒的危险,1980-1982年先后研制成功猪瘟绵羊肾细胞和奶山羊肾细胞活疫苗,1985年中监所和原农业部成都药械厂研发成功猪瘟犊牛睾丸细胞活疫苗,1985-1987年猪瘟牛睾丸细胞活疫苗在四川、重庆等地田间应用获得满意的效果。87年至今主要使用猪瘟牛睾丸细胞活疫苗,2006年南方几省“猪高热病”流行,通过流行病学分析、实验室检测发现猪瘟感染率较高,农业部推荐使用猪瘟大兔脾淋苗和高效价猪瘟细胞苗(政府采购猪瘟活疫苗(细胞源))。总之在各个阶段使用不同的猪瘟疫苗对猪瘟的防控都发挥了重要的作用。

2 猪瘟疫苗种类

猪瘟灭活疫苗我国已多年不生产使用了,我国各生产厂家均是用兔化弱毒株(C株)生产冻干活疫苗。按生产工艺和原材料的不同可分为猪瘟组织活疫苗和猪瘟细胞活疫苗。

猪瘟组织活疫苗

猪瘟脾淋苗(常用名),通用名是猪瘟活疫苗(兔源)、(脾淋组织),或称政府采购猪瘟活疫苗(兔源)、(脾淋组织),猪瘟脾淋苗是用种毒耳静脉接种健康大兔,无菌操作收取有定型热及轻热反应兔的脾脏和淋巴结制备。

猪瘟乳兔苗,通用名是猪瘟活疫苗(兔源)、(乳兔组织),猪瘟乳兔苗是用种毒接种3-5日龄乳兔,无菌操作收取肝、脾、肾及肌肉组织制备。

猪瘟牛体反应苗,是用种毒接犊牛,无菌操作收取含毒量高的脾脏和淋巴结制备。因牛感染牛病毒性腹泻和牛结核比率较高,现国家未批准猪瘟牛体反应苗的生产。

猪瘟细胞苗

常规猪瘟细胞苗(通用名),常用名是猪瘟活疫苗(细胞源),是用种毒接种牛睾丸细胞,收取毒价合符要求的细胞液制备。

高效价猪瘟细胞苗(通用名),常用名是政府采购猪瘟活疫苗(细胞源),生产工艺同常规猪瘟细胞苗,但每头份的毒价是常规猪瘟细胞苗的10倍,并对原苗的效价及配苗量作出了严格的规定,武汉中博等厂家通过培养工艺的改进而大幅度提高猪瘟原苗培养效价,高效价猪瘟细胞苗企业诳匦Ъ壑副耆范ㄎ15000 RID/头份。

组织苗和细胞苗的主要质量指标

① 猪瘟脾淋组织苗和乳兔组织苗,效价指标:≥150RID/头份,猪瘟组织活疫苗是用种毒接种活体大兔及乳兔收取含毒组织制备,其优点是能保证疫苗抗原在活体动物细胞内完整复制,并含有促进免疫的活性成分,免疫效果好,但此生产方式较为原始,生产过程难以操控,难以做到每批疫苗均无菌,《兽医生物制品生产规程》明确规定猪瘟组织活疫苗不得含有病源菌,且非病原菌每头份不得超过75个。故猪瘟组织活疫苗生产过程容易污染报废,不但生产成本高,也不易大批量生产。

常规猪瘟细胞苗,效价指标:≥750RID/头份。

高效价猪瘟细胞苗(政府采购猪瘟活疫苗(细胞源)),效价指标:≥7500RID/头份。猪瘟细胞苗必须无菌、无支原体、无牛病毒性-粘膜病毒污染。

④ 关于猪瘟活疫苗效价指标的确定:上世纪50年代中监所在进行猪瘟兔化弱毒培育时证实:猪瘟兔化弱毒1个兔体反应热(RID)和猪的最小免疫量相当,当时猪瘟脾淋苗效价是以成品脾淋组织含量作10000倍稀释兔检合格,相当于每头份100个最小免疫剂量,即100RID/头份。92年版《兽用生物制品规程》把猪瘟脾淋苗和乳兔苗效价指标都确定为150 RID/头份,一是为了统一猪瘟组织活疫苗的效价指标,同时也提高了猪瘟脾淋苗的质量指标。猪瘟牛睾丸细胞苗是1985年研发成功,常规猪瘟牛睾丸细胞苗效价指标确定为750 RID/头份,1987年在全国推广生产和使用,当时以猪瘟乳兔苗的免疫效果(接种中和抗体检测为阴性的仔猪,产生抗体水平的高低和保护力抗体的持续时间)为标准,用猪瘟乳兔苗同猪瘟牛睾丸细胞苗作免疫效果平行试验,试验证明:每头份含750 RID的细胞毒和每头份含150 RID乳兔组织毒免疫效果相当,因此我国常规猪瘟细胞苗效价一直执行750 RID/头份,而不是150 RID/头份(前些年有部分学者觉得常规猪瘟细胞苗效价也是150 RID/头份)。80年代后期和90年代常规猪瘟细胞苗免各地反映疫效果良好,当时动物防疫实施春秋普防,免疫的猪群大多在双月龄左右,这些猪只不但自身免疫机能更完善,同时母源抗体也下降到较低水平,猪群接种疫苗后免疫效果均较好。近年来随着养猪业的发展,国内外优良品种的引进,生猪交易频繁, 猪瘟的流行呈现一些新特点,特别是免疫抑制性疫病的广泛蔓延及存在,猪瘟的免疫也相应发生变化,国家把高效价猪瘟细胞苗(政府采购猪瘟活疫苗(细胞源))效价指标确定为7500RID/头份是完全必要的,符合当前猪瘟防疫的实际需要。

猪瘟活疫苗生产及检验过程中存在的问题

效力检验:猪瘟活疫苗生产规程规定效力检验有两种方法,一是用家兔测兔感量(RID),一定量的猪瘟兔化弱毒耳静脉接种成年家兔,体温会升高并稽留一段时间,根据猪瘟兔化弱毒这一生物学特性检测猪瘟活疫苗的效价。测兔感量法因用活体大兔检测,大兔的品种、体重、隔离免疫状态、以及环境温度对等对检测结果都有影响。某兽医生物药品厂曾经出同一批猪瘟牛睾丸细胞苗在A 地检验两次均不合格,而送至B地,一次效检两只兔子都呈定型热通过,重检结果一致,所以不同厂家的合格苗可能效价存在1-1.5倍的差别。猪瘟活疫苗效价指标只作了最低标准的规定,而未作高限指标的要求,生产厂家半成品检测时只要效价达到规定要求就可配苗,有生产厂家对猪瘟牛睾丸培养原液进行最终效价检测,发现有20%的原苗批次效价达到20万倍,还有5%的原苗批次效价达到50万倍(生产厂家细胞原液效价兔检达到5万倍就可配苗),这就可能造成同一厂家不同批次的疫苗效价都达到质量标准,但每个批次的真实效价可能存在1-2倍的差别。二是用猪效检测保护率,但须用强毒攻毒,因涉及强毒使用,生产厂家都采用测兔感量的方法。国外还有测PD50法(猪半数保护量),其实和我国的用猪效检一致,只是表示指数不一样而已。猪瘟活疫苗的效价检测方法国内很多生产厂家和科研院所都作过探索,如E2蛋白检测法、PPA-ELISA抑制法、新城疫病毒强化法等、定量PCR法等,这些方法都不能较准确反应疫苗的活毒的含量。虽然测兔感量法影响因素较多,现仍是猪瘟活疫苗效价测定的相比最准确的方法,猪瘟活疫苗的效价检测不能像其它病毒性活疫苗可准确监测其TCID50或CPE,因猪瘟兔化弱毒不产生细胞病变。

关于猪瘟细胞苗BVDV污染问题:牛病毒性腹泻-粘膜病毒(BVDV)牛感染率较高,近几年在猪群的感染率逐年升高,西方一些消灭猪瘟的国家猪群中也存在抗BVDV抗体。部分学者对猪BVDV的流行病学进行研究,初生仔猪猪感染BVDV后,虽不产生明显病理变化及临床症状,但母猪在妊娠前期感染可引起胎儿子宫内感染,仔猪表现为慢性肠炎及淋巴结、心外膜及肾脏的败血性出血。SCFV和BVDV属同属病毒,具有共同的可溶性抗原,血清学上有交叉反应,仔猪感染BVDV甚至可产生抗猪瘟强毒攻击的保护力,但猪感染BVDV对猪瘟活疫苗接种的免疫应答有何影响值得关注。猪瘟细胞苗一般采取牛睾丸原代细胞生产(部分厂家目前在尝试用MPK及ST 等传代细胞生产),培养过程中还需加犊牛或胎牛血清等生长因子,由于牛BVDV率感染较高,因此猪瘟牛睾丸细胞苗生产过程中有污染BVDV的可能。生产厂家应对生产相关原材料及猪瘟细胞培养毒液进行BVDV检测,我国猪瘟细胞活疫苗生产规程明确要求要进行牛睾丸原代细胞和成品作BVDV检验。

二、 猪瘟的预防

1 猪瘟的综合防控

任何一种疫病的防控都应该遵循传染病防控的基本原则,即控制传染源、切断传播途径、保护易感动物。这三种方法只要有一项得以有效实施,即可控制疫病的流行和发生,但其不是孤立的,往往是互为条件的。控制传染源是基础,最为重要,我国2003年的“SARS”为什么能在短时间内得以控制的关键因素应归功于对发病人群和疑似感染人群的严格隔离,可见控制传染源是防控动物疫病的最重要手段。切断传播途径一方面能控制传染源,另一方面也间接地保护了易感猪群。通过疫苗接种或药物预防从而使猪群获得保护是猪疫病防治最经济的手段。只注重某一措施控制甚至扑灭某种动物疫病是不现实的,必须“三管齐下”。猪瘟是影响我国养猪业最重要的猪疫病之一,很多兽医科技工作者和管理工作者把净化及扑灭猪瘟为己任。目前我国猪疫病流行呈复杂态势,猪瘟的流行与发生也呈现一些新变化,猪瘟的防控实施以猪瘟兔化弱毒活疫苗全面普防为主的措施,同时还应注重种群猪瘟的净化、改善饲养条件、加强饲养管理、严格执行消毒隔制度等猪疫病综合防控措施。

2 猪瘟参考免疫方案的制定

一个科学合理又具操作性的猪瘟免疫方案对猪瘟有效防控极为重要。所谓的“规范性”的适用范围广的免疫方案是没有的。去年农业部发布的猪病免疫方案也是参考性的。猪瘟免疫方案的制定应注重区域性、科学性和可操作性。免疫方案的制订应根据本地生猪的饲养状况、本地(场)猪瘟的流行情况、种猪的免疫状况等制定相应的个性化免疫方案。

规模饲养猪群

农业部发布猪瘟免疫参考方案

仔猪:0日龄乳前免疫(在母猪带毒严重,垂直感染引发哺乳仔猪猪瘟的仔猪实施)、20日龄首免、60日龄加强免疫。

后备及经产母猪:配种前免疫。

种公猪:一年两次免疫。

常规猪瘟免疫参考方案

仔猪:a 20-45日龄首免,以30-35日龄为宜,母源抗体干扰较小。首免日龄和免疫剂量的确定是根据母猪群体猪瘟免疫水平、以及当地猪瘟的流行情况、本场饲养条件、饲养管理水平等来确定,首免日龄愈提前,那就有适度增加首免剂量的必要,以期突破母源抗体的干扰。b 60-70日龄加强免疫,一般是首免后30-40日实施。c 带毒率较高母猪群所产的仔猪可实施乳前免疫。虽然乳前免疫能提高已先天感染猪瘟野毒仔猪的成活率,但乳前免疫操作上有诸多不便,同时对哺乳仔猪的生长发育有影响,对带毒母猪实施淘汰净化是防控仔猪猪瘟的最有效方法,并能提高母猪群体产仔率和哺乳及保育仔猪的成活率,一些实施种群猪瘟净化的猪场不但能很好地防控猪瘟,也取得很好的经济效益和社会效益。

后备母猪:后备母猪配种前必须加强免疫1次。

经产母猪:配种前免疫。为便于安排,可在哺乳期内实施或仔猪首免时同时免疫母猪。为保证所产仔猪母抗高且均匀一致,便于实施首免,实行产前4-6周免疫也可行。

种公猪:一年2次免疫。

新引进猪群:入场2天内免疫1次,以预防引进猪属猪瘟亚临床感染引发猪瘟发生有实际意义。

农户散养猪群

我国生猪饲养现状有村民放养、农户散养、规模饲养等方式,虽然规模饲养近几年发展迅速,但农户散养仍占很高比例。农户散养生猪猪瘟的免疫主要依靠各级动物防疫监督部门的直接参与或在其监督下实施。2000年以前实施春秋集中免疫、市场交易补免方案。现因口蹄疫、猪高致病性蓝耳病的协同免疫,猪瘟免疫方案也随之改变。

仔猪:仔猪阉割时首免(同时免疫口蹄疫疫苗),是目前农村地区简便易行且免疫效果较好的仔猪首免方案,以30-45日龄为宜,母源抗体干扰较小。春秋季集中普免或仔猪出售前免疫1次仍是有效的猪瘟预防措施(相当于仔猪的加强免疫)。

 后备母猪:配种前加强免疫1次。

经产母猪:仔猪阉割免疫时免疫,多次配种不成功的母猪应在春秋集中免疫时补免。

 种公猪:春秋季集中免疫(每年两次)。

3、 猪瘟免疫效果欠佳的主要原因

猪群疾病及管理方面的原因

猪群感染免疫抑制性病原:试验证明猪群一旦感染猪繁殖与呼吸综合症(PRRSV)、猪伪狂犬病(PRV)、细小病毒(PPV)、圆环病毒II型(PCV2)等都可影响猪瘟活疫苗免疫效果,这也可能是当今猪瘟免疫效果不够理想很重要的原因,为此,做好以上疫病的综合防治工作非常必要。在进行疫苗接种时,尽可能避免以上疫苗使用时的干扰,特别猪瘟活疫苗与猪蓝耳病疫苗的免疫应有较长的时间间隔。

② 亚临床感染的带毒母猪是引起仔猪天感染及先免疫耐受的重要原因,接种猪只属先天免疫耐受或持续性感染猪瘟野毒。中监所野毒人工感染母猪试验证实:母猪可持续带毒750天并持续排毒,引起水平传播和垂直传播。中监所检测全国2万多头种猪样品,野毒带毒率达11%,种猪带毒率高是猪瘟免疫效果不佳的又一重要原因。

猪群有遗传性免疫抑制病、种猪衰老、自身免疫机能下降

④ 猪群猪瘟野毒带毒率升高,病死猪处理没遵守相关技术规范和要求,病死猪往往成为流动的传染源。引种、生猪及猪肉产品的频繁市场交易可能引起猪群猪瘟野毒感染机会的增加,调查统计发现50%的猪瘟发病猪群是由引种和新购仔猪引起。

饲养条件及管理方面的原因。如无良好的饲养条件、忽视猪群各阶段的精细化管理及健全的生物安全体系等,这些方面都会影响猪群群体免疫机能,增加猪瘟野毒的感染机会。

疫苗及疫苗使用

中国兽医药品监所所试验表明:目前广泛使用C株牛睾丸细胞活苗1头份接种无猪瘟抗体和抗原的易感猪,能抵抗从不同省、区分离的不同强毒株的攻击,甚至能抵抗2株、3株、4株野毒的联合攻击,达到《兽用生物制品质量标准》的疫苗适时接种健康猪应有优良的免疫效果。

疫苗的质量:疫苗生产供应商保证不同的猪瘟活疫苗达到相应的质量指标,如常规猪瘟牛睾丸细胞苗效价不低于750RID/头份、且无菌、无BVDV等外源病毒污染;猪瘟脾淋苗效价不低于150RID/头份。

疫苗的保存和运输:猪瘟疫苗均是冻干活疫苗,需低温条件下(-15℃以下)保存及运输以保证疫苗抗原的活性,如在常温(25℃)保存有效期不超过10天。

免疫操作规范:如接种器具的清洗消毒、接种针头的长短粗细的选择、一猪一针头、接种速度适中及接种深度适当以防疫苗外逸等免疫操作基本要求也同样重要。

免疫方案的优化:科学合理又具操作性的猪瘟免疫方案对猪瘟有效防控极为重要。猪瘟免疫方案的制定应考虑区域性、科学性及可操作性,猪瘟免疫方案的制订应根据本地生猪的饲养状况、本地(场)猪瘟流行情况、种猪的实际状况制订相应的个性化免疫方案(见前述)。笔者曾走访一大型养猪场,该场听到仔猪猪瘟可以实施乳前免疫,实施1月后,场领导觉得乳前免疫不便操作,同时对哺乳仔猪生长影响较大,后就确定为为2日龄免疫,虽然该场照此方案实施了1年多未有猪瘟发生,但绝不能说明仔猪2日龄免疫猪瘟是科学的,因为2日龄免疫受母抗干扰极大。之后对母猪群抽样检测,不但猪瘟群体抗体水平较高同时未有猪瘟野毒感染,该场仔猪根本没必要实施乳前免疫。

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