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四川省PPV与PCV2的病原流行病学调查


来源:       发布时间:2013/1/31 0:00:00     点击率:12

四川省PPVPCV2的病原流行病学调查

徐志文

(四川农业大学动物生物技术中心,四川雅安  625014

摘要:从四川省21个规模化猪场采集样品273分,利用PCR方法检测并分析了猪细小病毒和猪圆环病毒的感染及混合感染情况,结果共检出PPV病原阳性样品47份(17.22%);PPV阳性猪场8个(38.1%);种猪的感染率较高,仔猪感染率相对较低;检出PCV2病原阳性样品143份(占52.38%),PCV2阳性猪场18个(占85.7%);PCV2感染随猪年龄的增长而升高;检出PPVPCV2混合感染样品29份(占10.62%);同时存在PPVPCV2的猪场6个(占28.7%),混合感染主要集中在母猪和保育仔猪阶段。仅有3个猪场未检出PPVPCV2病原,占14.3%。该结果说明PPVPCV2及其混合感染在四川省流行广泛,对养殖业构成了较严重的危害。

关键词:猪细小病毒;猪圆环病毒;流行病学

 

猪细小病毒(PPV)是引起母猪繁殖障碍的主要病原之一,PPV感染主要引起死胎、木乃伊胎、胚胎和胎儿死亡、重吸收,及造成母猪返情等,此外PPV还与皮炎、肠炎、腹泻及呼吸系统疾病有关。PPV常呈潜伏感染,尤其是低剂量持续感染的现象经常发生,加之病毒抵抗力强,使本病难以控制和根除。猪2型圆环病毒(PCV2)与多种新的猪传染病的发生密切相关,包括断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)、猪呼吸道病综合征(PRDC)及猪增生性和坏死性肺炎(PNP)等,造成猪只生长缓慢,饲料报酬降低,同时侵害猪的免疫系统,导致猪的免疫机能下降,造成与其他病原混合感染而引起更严重的损伤。该两种疾病常发生混合感染而备受关注,给世界养猪业带来巨大的经济损失。目前,我国已有多个省市发生该两种疾病的报道。

为了解细小病毒病和圆环病毒病在四川省猪场的流行现状和特点,我们从四川省规模化猪场采集样品,进行PPVPCV2病原流行病学调查。本研究自2007年起,对21个规模化猪场共采集273份样品,通过PCR分析了四川省该两种疾病及其混合感染流行情况,为进一步预测疫情的发展动态,及制定相应的防控策略奠定基础。

1 试验材料与方法

1.1 试验材料   Tap DNA聚合酶(含有dNTPs2.5mol/L each)、10×Tap BufferMg2Free)、Mg2+(25mmol/L))、饱和酚、氯仿均购于宝生物工程(大连)有限公司;TE10mmol/L Tris-HCL1mmol/L EDTApH7.6)自配,引物由上海英骏公司合成。

1.2 主要仪器   MyCycler PCR扩增仪与全自动凝胶图像分析系统均购自美国Bio-Rad公司,离心机购自德国Sigma公司。

1.3 样品的收集与处理   20082010年期间,通过现场采集、养殖场送检测方式,从四川成都市及周边县市的21个规模化猪场采集样品273份,要求猪场母猪存栏量达100头以上。样品包括精液、扁桃体、全血和组织(肺脏、脾脏、肾脏、淋巴结、扁桃体等),具体情况见表1

1 送检样品统计信息

病猪发育阶段

数量/

比例/%

病料成分

公猪

36

13.19

精液、全血

经产母猪

59

21.61

全血、扁桃体

后备母猪

44

16.11

全血、扁桃体

胎儿

30

10.99

胎儿

哺乳仔猪

42

15.38

组织、全血

保育仔猪

45

16.48

组织、全血

育肥猪

17

6.23

组织、全血

取适量待检样品(约100mg),用PBSpH7.2)混合,用组织研磨器充分研磨后冻融3次,10000r/min离心病料悬液10min,取上清400μL,按照常规方法抽提病毒DNA

1.4 检测方法与统计分析   应用曹洪志构建的PPVPCV2的PCR检测方法,对待检样品进行诊断。根据PPVPCV2基因组特点各设计一对特异性异性引物。PPV的引物序列为:P1:5ˊ-GGGACCAGGCAACAGAC-3ˊ,P2:5ˊ-CTGCGGTTTGAGCCATC-3ˊ;PCV2引物可排除PCV1的干扰,序列为P3:5ˊ-CACGGATGTTGTATTCCTGG-3ˊ,P4:5ˊ-CCGCACCTTCGGATATACTAT-3ˊ,预扩增片段长度分别为750bp494bp

将抽提的病毒DNA,采用相同的组分配制PCR反应体系,PPVPCV2的PCR反应程序均为:95 5min,进入95 30s57 45s,共35个循环,最后72℃延伸5minPCR完成后,取10μL产物于1.5%琼脂糖凝胶75V电泳30min后,应用凝胶图像分析系统进行分析。对检测结果进行统计分析。

2 实验结果

2.1 总体阳性率   273份被检样品中,共检出PPV抗原阳性样品47份,阳性率为17.22%PCV2抗原阳性样品143份,阳性率为52.38%PPVPCV2混合感染样品29份,阳性率为10.62%

2.2 各类猪群感染率   273份被检样品中,PPV病原阳性率流产胎儿(33.33%)最高,其次是经产母猪(22.03%),以后依次是后备母猪(15.91%)、公猪(13.89%)、保育仔猪(11.90%)、哺乳仔猪(11.90%)和育肥猪(5.88%),说明PPV在种猪中的流行较普遍,而在仔猪中流行相对较低。PCV2病原阳性率经产母猪最高(74.58%),公猪(66.67%)次之,以后依次为后备母猪(61.36%)、保育仔猪(60.00%)、育肥猪(58.82%)、哺乳仔猪(21.43%)和流产胎儿(6.67%),PCV2的流行表现出阳性率随猪只年龄增长而升高的趋势。而PPVPCV2混合感染也比较普遍,主要出现在母猪和保育仔猪阶段,如表2所示。

2  各类猪群感染情况统计

猪群类型

样品数量/

PPV阳性数及百分比

PCV2阳性数及百分比

PPV/PCV2阳性数及百分比

公猪

36

53.89%

24/66.67%

3/8.33%

经产母猪

59

1322.03%

44/74.58%

9/15.25%

后备母猪

44

715.91%

27/61.36%

7/15.91%

胎儿

30

1033.33%

2/6.67%

1/3.33%

哺乳仔猪

42

511.90%

9/21.43%

3/7.14%

保育仔猪

45

613.33%

27/60.00%

5/11.11%

育肥猪

17

15.88%

10/58.82%

1/5.88%

2.3 猪场阳性率   273份被检样品采自21个规模化猪场,其中PPV阳性猪场有8个,阳性率为38.1%PCV2阳性猪场达18个,阳性率为85.7%。同时有6个猪场同时存在PPVPCV2感染,阳性率为28.7%,如表3所示。该结果说明PPVPCV2在四川省的流行比较普遍。

3  PPVPCV2感染猪场情况统计

感染类型

数量/

阳性率/%

PPV感染

8

38.1

PCV2感染

18

85.7

PPVPCV2混合感染

6

28.7

3 讨论

目前,对PPVPCV2感染尚无特异性疗法,控制PPVPCV2只能采取综合防制措施。研究PPVPCV2的流行病学特点对于正确制定防疫策略具有重要意义。

已有报道显示,PPV在我国广泛存在,许多学者对PPV在四川省的流行病学进行了调查,但是研究报道仅限于血清学流行病学调查,目前尚未见到对四川省PPV抗原流行病学的报道。邬捷等1986年应用HI方法证明PPV在四川五个猪场内普遍存在,特别是成年公猪和2胎以上的经产母猪感染更为严重,感染率分别为68.47%84.48%,有些猪场达到80%100%。黄旭雯等1997年报道应用HI方法对四川20个地、市、州和9个种畜场进行检测,发现仅甘孜州无PPVPPV的阳性率为33.87%,并认为四川省PPV阳性率的高低与引进种猪推广杂交有关,种猪场与杂交推广面大的县阳性率高,而盆周和山区较低。但是,血清学调查结果无法区分抗体阳性由疫苗接种产生还是由感染产生,而且仔猪的检测结果会受到母源抗体的干扰,不能直接的体现PPV的受感染状况。本实验研究结果显示PPV四川省流行普遍,并表现出在种猪中的流行较高,而在仔猪中流行相对较低的现象。

PCV2的流行在近年来受到广泛的关注,本研究对PCV2的病原流行病学调查显示,PCV2在四川省也普遍存在,而且表现出了PCV2感染随猪年龄的增长而升高的趋势,这与郎洪武、吴俊等的研究结论一致。Pogranichnyy等实验显示即使在健康猪群中PCV2的阳性率也达到了62.5%。吴俊等2010年报道了应用ELISAPCR方法对四川省6个猪场的流行病学调查,结果表明PCV2抗体总阳性率为69.57%PCR检测结果为种公猪阳性率为70.00%,经产母猪阳性率为90.00%。本实验结果较之有所降低,可能与调查的猪场与区域差异有关。

同时,本实验调查显示PPVPCV2混合感染也比较普遍,主要出现在母猪和保育仔猪阶段。目前,国内外已有多篇文献关于PCV2和其他病原因子混合感染的报道,并认为PPVPCV2的混合感染在PCV2的致病过程起着重要的作用。Choi等对10个临床PMWS病例进行PPV检测,发现其中4个病例同时感染有PPV病毒。国内许多学者的调查也显示了PPVPCV2及其他病原与PCV2的混合感染在我国普遍存在。

随着近年来众多学者对这两种病毒不断的研究,取得了许多进展,虽然仍有很多问题无法解决,但是相信随着研究的不断深入,必将促进对该两种疾病的预防和控制。